Enzymimmunoassay zur Messung des von Willebrand-Faktors (VWF) an Kollagen, das mit hochmolekularen VWF-Multimeren assoziiert ist. VWF ist ein wichtiges Blutgerinnungsprotein, das sowohl an der Unterstützung der Thrombozytenadhäsion als auch an der Stabilisierung des Gerinnungsfaktors VIII beteiligt ist. VWF-Multimere mit höherem Molekulargewicht dienen dazu, aktivierte Blutplättchen über spezifische Membran-Glykoproteine an Bindegewebsfasern zu binden, die an Wundstellen freiliegen, und so die Blutgerinnung und den Wundverschluss zu fördern. Die Kollagenbindung von VWF ist mit den höhermolekularen (HMW) Formen von VWF verbunden.
Prinzip Während des ersten Inkubationsschritts binden die in der Probe vorhandenen VWF-Multimere an das Kollagen, das an der Oberfläche der Mikrotiterplatte befestigt ist. Ungebundene Plasmaproteine werden dann durch Waschen entfernt, und in einer zweiten Reaktion binden Peroxidase-konjugierte Anti-VWF-Antikörper an die eingefangenen VWF-Multimere. Überschüssige Antikörper werden abgewaschen, und die gebundene Aktivität wird durch Zugabe von Substrat bestimmt. Die Farbentwicklung des Substrats wird durch die Zugabe von Säure gestoppt. Die resultierende Farbintensität, die proportional zu den in der Probe vorhandenen hochmolekularen VWF-Multimeren ist, wird photometrisch bei 450 nm bestimmt.
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